近年來，分子診斷成為IVD領(lǐng)域較為熱門的分支，其檢測對象主要為核酸和蛋白質(zhì)，以核酸分子為主。在其所需要制備的生化樣品中，往往會有IPTG的身影。而IPTG價(jià)格昂貴，使用量過多時(shí)不僅有毒性，還會提高生產(chǎn)成本，所以制品中IPTG含量的檢測十分重要。本文將為大家總結(jié)IPTG的應(yīng)用，并介紹一種新的檢測IPTG的方法。
IPTG，中文名為異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì)。其具有如下作用：
（1）挑選基因重組體：當(dāng)pUC系列的載體DNA以lacZ缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體的載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，如果在平板培養(yǎng)基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補(bǔ)性，可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑選出基因重組體；
（2）作為具有l(wèi)ac或tac等啟動子的表達(dá)載體的表達(dá)誘導(dǎo)物使用。IPTG作為一種分子生物學(xué)試劑，常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等；基因工程技術(shù)中，采用IPTG作為誘導(dǎo)劑，可促進(jìn)目的蛋白的大量表達(dá)。
 其含量該如何檢測呢？IPTG實(shí)際上是一種半硫代的化合物，由于含硫的化合物分子中缺乏發(fā)光基團(tuán)，無法采用常規(guī)的紫外-可見檢測器檢測，目前最常用的檢測方法是衍生化聯(lián)合熒光的HPLC檢測法檢測。但是這種檢測法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，選擇性差。因此，開發(fā)一種IPTG含量的檢測方法，以實(shí)現(xiàn)對生化樣品中IPTG含量的準(zhǔn)確測定，具有積極的現(xiàn)實(shí)意義。研究人員開發(fā)了一種IPTG含量的檢測方法，包括如下步驟：
（1）前處理：超濾離心（超濾離心管中超濾管的孔徑范圍為0.001~0.02微米），得到分子量小于3000道爾頓的待測樣品；
（2）IPTG標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用離子色譜-脈沖安培檢測法進(jìn)行檢測。色譜柱為反相色譜柱；流動相為緩沖溶液（pH值為1~11）和有機(jī)溶劑的混合流動相（體積比為99~80：1~20），得到IPTG標(biāo)準(zhǔn)曲線；
（3）檢測待測樣品：離子色譜-脈沖安培檢測法，并對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，得IPTG具體含量。
 該方法采用超濾離心管進(jìn)行處理樣品，快速高效去除體系中的雜質(zhì)，將處理后的待測樣品溶液通過pH緩沖溶液與有機(jī)溶劑的混合流動相進(jìn)入反相色譜柱進(jìn)行分離，IPTG很快洗脫出來，再通過脈沖安培檢測器進(jìn)行檢測，完成分析。樣品前處理簡便、專屬性好、靈敏度高，適于推廣應(yīng)用。
 
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