中文名： 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)

英文名稱： Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside

用途： 異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌 代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG 常用于需要誘導(dǎo) β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。它常與 X-Gal 或 Bluo-Gal 結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo) lac 操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG 與 lacI 阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止 β-半乳糖苷酶編碼基因 lacZ 的抑制。

使用方法： 首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液，并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂 培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml)，制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體)，然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長(zhǎng)出菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。

配制方法： 在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容至10ml，用0.22μm濾器 過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。

優(yōu)點(diǎn)：

1.能誘導(dǎo)酶的合成，但又不被分解的分子，稱為安慰誘導(dǎo)物。由于乳糖雖可誘導(dǎo)酶的合成，但又隨之分解，產(chǎn)生很多復(fù)雜的動(dòng)力學(xué)問題，因此人們常用安慰誘導(dǎo)物來進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)。

2.IPTG不被菌體代謝，為乳糖類似物，一旦進(jìn)入細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生持續(xù)長(zhǎng)久的誘導(dǎo)效果，所以IPTG的誘導(dǎo)效率高，往往只需要很少量(1mmol/L)即可達(dá)到理想誘導(dǎo)效果。由于IPTG不被代謝，在胞內(nèi)專一誘導(dǎo)外源蛋白的表達(dá)。不受細(xì)胞代謝的影響，誘導(dǎo)效果持續(xù)穩(wěn)定。乳糖有雙效作用，既能做為誘導(dǎo)劑異乳糖的前體物質(zhì)，又可以做碳源，在誘導(dǎo)過程中，很不穩(wěn)定，IPTG因其優(yōu)異的穩(wěn)定性決定了它適合做實(shí)驗(yàn)研究用。

3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。

4.半乳糖苷鍵中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點(diǎn)的親和力相同，IPTG雖不為β–半乳糖苷酶所識(shí)別，但它是lac基因簇十分有效的誘導(dǎo)物。

注意事項(xiàng)： 培養(yǎng)噬菌體時(shí)，Top agar中的添加量為：25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有

IPTG 的培養(yǎng)基4℃避光保存，須在1~2 周內(nèi)使用。

保存： 2-8°C冷藏保存，配制好后保存于-20°C，室溫可放置一個(gè)月。遠(yuǎn)離熱源及氧化劑。