鈣黃綠素染色步驟說(shuō)明：
 
鈣黃綠素（Calcein）用于絡(luò)合指示劑熒光指示劑等領(lǐng)域。其鈉鹽為橙紅色結(jié)晶，溶于水，呈黃色而有綠色熒光，不溶于無(wú)水乙醇和乙醚。以下為鈣黃綠素染色步驟，僅供參考。
 
鈣黃綠素染色步驟：
1、用DMSO制備1 mM 的鈣黃綠素溶液，并用PBS將其稀釋制成1～50 μM的鈣黃綠素溶液。
2、將1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的鈣黃綠素溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。
3、在37℃培養(yǎng)細(xì)胞15-30分鐘。
4、用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌細(xì)胞兩次。
5、用490 nm激發(fā)波長(zhǎng)，515 nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
a、如果鈣黃綠素溶液很難進(jìn)入細(xì)胞，可以使用表面活性劑，如Pluronic F127。
b、或者您也可以用1/10濃度的Calcein-AM溶液代替培養(yǎng)基。
 
用途：絡(luò)合指示劑。熒光指示劑。測(cè)定鈣、鍶、鋇、銅和錳。鈣黃綠素，Calcein另外在核酸擴(kuò)增過(guò)程中會(huì)形成大量的焦磷酸根離子。熒光染料中的錳離子與鈣黃綠素結(jié)合導(dǎo)致熒光淬滅，同時(shí)染料顏色為橙色。當(dāng)擴(kuò)增反應(yīng)形成焦磷酸根離子時(shí)，錳離子與焦磷酸根離子結(jié)合形成焦磷酸錳，引起熒光信號(hào)的產(chǎn)生，同時(shí)染料顏色變?yōu)辄S綠色。鈣黃綠素目前已廣泛應(yīng)用于恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的熒光檢測(cè)。
 
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